什么是图位克隆
图位克隆(Map - based cloning) 又称定位克隆(positional cloning),用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的,无需预先知道基因的DNA 顺序,也无需预先知道其表达产物的有关信息,
1) 首先找到与目标基因紧密连锁的分子标记;
2) 用遗传作图和物理作图将目标基因定位在染色体的特定位置;
3) 构建含有大插入片段的基因组文库(BAC 库或YAC) ;
4) 以与目标基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库;
5) 用获得阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群;
6) 通过染色体步行、登陆或跳跃获得含有目标基因的大片段克隆;
7) 通过亚克隆获得含有目的基因的小片段克隆;
8) 通过遗传转化和功能互补验证最终确定目标基因的碱基序列。
图位克隆法的图位克隆法介绍
图位克隆(Map-based
cloning)又称定位克隆(positional
cloning)，1986年首先由剑桥大学的Alan
Coulson提出，用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行基因克隆的一种方法，在利用分子标记技术对目的基因进行精确定位的基础上，使用与目的基因紧密连锁的分子标记筛选DNA文库，从而构建目的基因区域的物理图谱，再利用此物理图谱通过染色体步行逼近目的基因或通过染色体登陆的方法最终找到包含该目的基因的克隆，最后通过遗传转化和功能互补验证最终确定目的基因的碱基序列。
图位克隆的特点是无需预先知道基因的DNA顺序，也无需预先知道其表达产物的有关信息，但应有以下两方面的基本情况。一是有一个根据目的基因的有无建立起来的遗传分离群体，如F2、DH、BC、RI等。二是开展以下几项工作：
1)首先找到与目标基因紧密连锁的分子标记；
2)用遗传作图和物理作图将目标基因定位在染色体的特定位置；
3)构建含有大插入片段的基因组文库(BAC或YAC库)；
4)以与目标基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库；
5)用获得阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群；
6)通过染色体步行、登陆或跳跃获得含有目标基因的大片段克隆；
7)通过亚克隆获得带有目的基因的小片段克隆；
8)通过遗传转化和功能互补验证最终确定目标基因的碱基序列，步骤见图4-10。下面将对其中几个关键环节予以叙述。
